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1、什么是植物组织培养? 在生物技术领城中有什么地位?

指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术

植物组织培养技术从属于生物技术领域中的细胞工程：

生物技术是以生物学科为基础，利用生物个体或生物器官、组织、细胞的特性，设计构建具有预期形状的新物种，以及与工程原理相结合进行产品加工的综合性技术体系。

细胞工程是应用生物学和生物分子学的方法，借助工程学的技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，获得特定的细胞和新生体的有关理论的学科。

2、植物组织培养技术有何特点?

组织培养的特点

1.无菌条件下进行

2.多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的

3.材料为离体状态。

4.可以不断增殖，并通过调整成分来控制实验的目的

5.在封闭的容器中进行，气体通过封口材

进行交换

6温度、光照时间和强度人为设定

3、简述植物组织培养的应用?

1.植物离体快繁。

2.无病毒苗木培养。

3.培育新品种或创制新物种。

4.次生代谢物生产。

5.植物种质资源的离体保存。

6.人工种子。

二、影响细胞脱分化和再分化的因素

(一) 影响细胞脱分化的因素

植物离体培养中，细胞脱分化与外植体本身以及环境条件有关，影响因素主要有:

1.损伤：刺激增殖，生命的自我调节方式。

2.生长调节剂:

3.光照:弱光或黑暗有利于脱分化的细胞分裂。

4.细胞位置

5.外植体的生理状态：不同年龄不同季节

6.植物种类差异：双子叶易于单子叶植物

1、名词解释: 细胞全能性、胚状体、脱分化、再分化。

细胞全能性：植物体的每一个具有完整细胞核（不论性细胞或体细胞），在一定条件下可发展为完整植株

胚状体：在植物组织培养中，起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成具有双极性的结构

脱分化：把分生组织中的不分裂的静止细胞，放置在一种能促进细胞增殖的培养基以后，细胞内就会发生变化，从而使细胞进入分裂状态。即一个成熟细胞转变为分生状态的过程。

再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，其至形成完整的植株的现象。

2、影响细胞脱分化和再分化的因素?

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影响细胞脱分化的因素

植物离体培养中，细胞脱分化与外植体本身以及环境条件有关，影响因素主要有:

1.损伤：刺激增殖，生命的自我调节方式。

2.生长调节剂:

3.光照:弱光或黑暗有利于脱分化的细胞分裂。

4.细胞位置

5.外植体的生理状态：不同年龄不同季节

6.植物种类差异：双子叶易于单子叶植物

组培室地址选择要考虑哪些因素？

1. 功能齐全常规的植物组织快繁流程为：培养器皿的清洗；培养基的配置、分类、扎口和灭菌；外植体的灭菌和接种；继代增殖培养；生根诱导；试管苗的驯化移栽与初期管理。为了完成上述工作，必须有一个设备完备、功能齐全的实验室。水电必须安全通畅，实验场地必须足够宽敞，各种仪器均能正常工作，器皿器械必须配备充足，否则植物组织快繁工作就不能正常进行。

2. 布局合理一个合理的实验室布局，应该考虑不同分室的功能，又要顾及实验操作的连贯性。例如，实验室各分室的大小、比例要合理；洗涤室等分室要求能满足多人同时操作，而缓冲间和接种室却宜小不宜大、在操作的连贯性上，洗涤室可离接种室稍微远些，以防止外界污染；而培养室可紧靠接种室以便于培养瓶的转移。另外，每个分室中仪器的安装位置也要妥善布置，充分考虑使用要求及安全性；洗手池、下水道的位置要适宜，不得对培养带来污染。

3. 环境清洁保持实验室清洁，这是组培成功的最基本要求，是可以从根本上有效控制污染的关键，否则会是植物组织培养遭受不同程度甚至是不可挽回的损失。因此，实验室建造时，应采用产生灰尘较少的建筑材料，过道、防尘设备、外来空气的过滤装置等设计是必要的。

4. 易于灭菌组培室墙壁和天花板、地面的交界处宜做成弧形，便于日常清洁；管道要尽量暗装，安排好暗敷管道的走向，便于日后的维修，以确保在维修是不造成污染。下水道开口位置应对实验室的洁净度影响最小，并要有避免污染的措施。接种室、培养室装修材料还须经得起清洁、冲洗和灭菌，并设置能确保与其洁净度相应的控温控湿设施。

组培室的基本组成有哪些？

1.准备室：洗涤区、灭菌区、化学实验区

2.无菌操作室

培养室

4.细胞学实验室

组培室各功能区的主要仪器设备有哪些？

1.准备室：洗涤区、灭菌区、化学实验区

设备：工作台、药品柜、冰箱、烘箱、天平、蒸馏水器

2.无菌操作室

设备：超净工作台、接种箱

培养室

设备：培养架、空调机、组培专用灯

4.细胞学实验室

设备：培养皿、镊子、剪刀、解剖刀、解剖针

常用的生长素和分裂素有哪些种类？各有什么作用？

①生长素类:诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化，促进细胞伸长，促进生根（根对生长素最敏感，其次茎和芽）

种类（顺序由强到弱）：2，4-D（2,4-二氯苯甲乙酸），NAA（萘乙酸），IBA（吲哚丁酸），IAA（吲哚乙酸）

②细胞分裂素类: 促进细胞分裂与扩大

诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长

抑制根的分化

种类（顺序由强到弱）: Zt（玉米素 ）TDZ（噻苯隆）6-BA（6-苄基腺嘌呤）Kt（激动素）

试述培养基配制的基本过程？

1.将母液按顺序摆放

2.取适量的蒸馏水（所需培养基的三分之二）入容器

3.按需量依次取母液及生长物质调节

4.加入蔗糖（30g/L）溶解

5.加琼脂（6-10g/L）煮沸2-3min

6.定容

7.调节PH值（PH=5.8）

8.分装培养瓶，封口

9.高压灭菌

谈谈MS培养基的特点？

②接种室和培养室 。人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌，尤其是接种过程中非工作人员的进出；接种室设计不合理，造成室内灰尘、细菌过多；超净工作台置于灰尘太多的地方，过滤装置使用过久、保养不当造成失效；组培室、接种室门窗封闭不严，利于杂菌传播；培养室面积大易污染，室 内温度高、空气湿度大，菌类繁殖旺盛也会加重污染。

如何预防

1.外植体的选取

选取幼年植株或生理年龄为幼态的材料；外植体要求杂菌少、易启动且内生菌少，宜选取生长健壮的植株材料

灭菌剂的选择

灭菌剂需有良好的灭菌效果，不会对外植体造成损伤或损伤较小，且容易用无菌水冲净或能自行分解，不会在外植体上残留而影响其生长

培养容器和接种器具。

操作时不可重复使用器械，用一次消毒一次。

接种人员

接种人员必须自身保持清洁，进入超净工作台之前消毒，操作小心，倾斜封口，防止灰尘落入培养瓶。

植物快繁的器官发生类型有哪些？

植物快繁的器官再生主要分为五种类型：

短枝发生型

从生芽发生型

（枝发生型和从生芽发生型属于芽再生 ）

不定芽发生型

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胚状体发生型

原球茎发生型

试述植物快繁的全过程及影响因素。

植物快繁的全过程：

无菌（或初代）培养的建立

繁殖体增殖

芽苗生根

小植株的移栽驯化

影响快繁的因素：

主要影响因素：外植体、培养基、培养条件、继代培养、移栽

植物离体繁殖商业化生产中应注意哪些问题？

污染

遗传稳定性

玻璃化

褐化

黄化

试管苗在移栽之前为什么要炼苗？

试管苗是在无菌、有营养供给、事宜光照和温度近100%的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的小苗有着很大的差异

从叶片上看，①试管苗的角质层不发达

②叶片通常没有表皮毛，或仅有较少皮毛

③叶片上有大量的水孔

由此可知，试管苗更适于高湿环境生长，当将他们移栽到试管外环境时，试管苗失水率会很高，非常容易死亡。因此，为了改善试管苗的上述不良生理、形态特点，则必须经过与外界相适应的驯化处理

简述提高试管苗成活率的途径？

影响试管苗移栽成活率的因素包括内因和外因

对于内因：选择生理状况好的壮苗进行移栽

对于外因：

1.选择不同的栽培基质，采用有基质比无基质要好，复合基质比单一基质要好

2.进行消毒

3.环境条件，控制好前10d的温湿度和光照，直至切至与自然环境相适应，由异养转化为自养

4.从无菌向有菌过度

5.适当施加植物生长调节剂

6.降低无机盐浓度，有利于移栽成活

7.在生根培养中加入少量活性炭

植物无病毒植株的培养

1.植物脱毒的意义

脱毒：采用一定的方法出去植物体内病毒的技术

无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木

意义：产无病毒种苗，防止品种退化；便于运输

植物脱毒的方法

获得无病毒繁殖体的方法：严格检疫，引进无毒种苗；筛选无毒个体；组培方法脱毒，培育无毒株

茎尖培养脱毒

原理：感染病毒在植株的体内分布有不均匀性，病毒的数量随植株部位及年龄而异，在根尖和茎尖病毒含量很少或不含病毒。

茎尖不带病毒原因：

病毒通过维管系统移动，分生组织中不存在维管系统竞争机制: 茎尖分生组织中，代谢活性高，竞争中病毒复制处于劣势

病毒钝化系统在茎尖分生组织内活性最高

分生组织内高水平的内源激素抑制病毒的增殖

在满足培育材料成苗的前提下，茎尖越小越好

小茎尖：顶端分生组织+叶原基（1-2个），大小为0.1mm—1mm

影响茎尖脱毒效果的因素：植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小、培养基营养

热处理脱毒

原理：一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）即钝化失活。

其他组织培养脱毒方法

愈伤组织培养脱毒

珠心胚培养脱毒

抗病毒剂的应用

微尖嫁接脱毒

脱毒苗的鉴定

1.种植鉴定：脱毒苗种植后与正常无毒植株比较，不表现病毒症状的植株可以判定为脱毒苗，此方法简单，费用低，时间要长，结果与判定的经验有关；

2.指示植物鉴定：将需要鉴定的脱毒苗嫁接到指示植物上，观察其发病表现，没有表现发生病毒病的可判定为脱毒苗，此方法简单，费用低，结果可靠，但时间要长一些；

3.分子生物技术鉴定：提取脱毒苗的组织液进行病毒检测，没有检测到带毒的植株可判定为脱毒苗。此方法有多种，检测速度快，灵敏度高，所需费用较高。

无病毒苗的保存与繁殖

分为隔离保存与立体保存两种方法

隔离保存：

植物病毒主要是通过蚜虫、叶蝉、土壤线虫为媒介进行传播。通常无毒苗应种植在隔虫网内。栽培用的土壤也应进行消毒。周围环境也要整洁，出去网室周围的杂草和滋生蚜虫等传播媒介的植物。并及时喷施农药防治病虫害，对隔离的无毒苗应定期检查。

离体保存：

低温保存（低温、低光照，改变培养基成分）

超低温保存（在-196℃的液氮超低温下保存）

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